武汉阳达生物科技有限公司供应武汉呋喃西林检测试剂盒 呋喃西林代谢物（SEM）ELISA检测试剂盒说明书 一、概要 硝基呋喃类药物因有非常好的抗菌作用和药动力学的特性，曾经被广泛应用，作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。但在长时间的实验研究过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，正因为如此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用 用来检测呋喃西林代谢物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术，采用SEM衍生物的特异性抗体，具有很高的精确度和灵敏度，较低的操作技术要求和短暂的检测时间，检测样品量大等特点在检测中很好的表现出来。 本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。 二、试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被呋喃西林代谢物抗原，样品残留的呋喃西林代谢物和微孔条上预包被的抗原竞争抗呋喃西林代谢物抗体，加入酶标二抗后，经TMB底物显色，样品吸光度值与其残留物呋喃西林代谢物呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中呋喃西林代谢物的含量。 三、适用范围 可定性、定量检测动物组织（鸡、猪），蜂蜜，鱼虾类和鸡蛋样品中的呋喃西林代谢物的残留量。 四、检测步骤 测定前应须知： 1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。 2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。 3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。 4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。 操作步骤： 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。 3、洗涤工作液在使用前也需回温。 4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。 5、加标准品/样本：加标准品/样本20ml/孔到对应的微孔中，再加入呋喃西林代谢物酶标物50ml/孔，再加入呋喃西林代谢物抗试剂80ul/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。 6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。 7、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应20～30min。 8、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。 五、 结果判定 结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样品吸光值与其所含呋喃西林代谢物成负相关。 1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.569，样本2的吸光度值为1.725，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.523；0.05ppb为2.217；0.15ppb为1.566；0.45ppb为0.842；1.35ppb为0.387；4.05ppb为0.145。则样本1的浓度范围是0.45ppb～1.35ppb；样本2的浓度范围是0.05ppb～0.15ppb，再乘以其对应的稀释倍数即可得出样品中呋喃西林代谢物的浓度范围。 2、定量分析 （1）百分吸光率的计算，标准品或样品的百分吸光率等于标准品或样品的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即 百分吸光度值（%）＝ B ×100% B0 B—标准品或样品溶液的平均吸光度值 B0—0(ppb)标准品的平均吸光度值 样品的稀释倍数： 肌肉、肝脏组织样品稀释倍数：1 六、检测方法灵敏度、准确度、精密度 试剂盒灵敏度：0.05ppb 检测限： 组织样品检测下限…………………………………0.1ppb 回收率： 水产、肌肉、肝脏组织 ……………………… 80±15% 精密度：试剂盒的变异系数均小于10% 本公司地址：湖北武汉东湖新技术开发区东信路光谷创业街10栋