武汉阳达生物科技有限公司供应武汉三聚氰胺ELISA检测试剂盒 三聚氰胺（melamine）ELISA检测试剂盒说明书 一、概要 三聚氰胺是一种低毒、无味的纯白色单斜棱晶体，形似蛋白粉，属于三嗪类含氮杂环有机化合物，广泛应用于塑料、染料、化肥的生产和纺织行业。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在检测中造成蛋白质含量较高的假象。目前在饲料、牛奶、奶粉、饼干、奶糖等相关产品均发现有三聚氰胺残留现象。动物实验结果表明，三聚氰胺的摄入可能会导致繁殖障碍、膀胱炎、慢性肾炎、肾结石、甚至膀胱癌。现有的检测三聚氰胺方法如液相色谱-质谱联用法、质谱电喷射离子技术其样品前处理复杂、所需仪器昂贵、操作复杂、耗费时间。而使用三聚氰胺ELISA试剂盒能够既快速又准确的分析样品中三聚氰胺残留。 本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。 二、试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争抗三聚氰胺抗体，加入TMB底物显色，样本吸光值与其残留物三聚氰胺成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。 三、适用范围 可定性、定量检测牛奶、奶粉、饲料、动物组织和鸡蛋等样本中三聚氰胺的残留量。 四、交叉反应率 三聚氰胺……………………………………………100％ 九、检测步骤 测定前应须知： 1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。 2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。 3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。 4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。 操作步骤： 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。 3、洗涤工作液在使用前也需回温。 4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。 5、加标准品/样本：加标准品/样本50ml/孔到对应的微孔中，再加入酶标物50ml/孔，再加入抗试剂50ml/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min。 6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。 7、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境反应15min。 8、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。 十、 结果判定 结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含三聚氰胺成负相关。 1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.569，样本2的吸光度值为1.725，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.523；10ppb为2.217；30ppb为1.566；90ppb为0.842；270ppb为0.387；810ppb为0.145。则样本1的浓度范围是90ppb～270ppb；样本2的浓度范围是10ppb～30ppb，再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中三聚氰胺的浓度范围。 2、定量分析 （1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即 百分吸光度值（%）＝ B ×100% B0 B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B0—0(ppb)标准溶液的平均吸光度值 （2）标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光率为纵坐标，以三聚氰胺标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中三聚氰胺实际残留量。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取） 本公司地址：湖北武汉东湖新技术开发区东信路光谷创业街10栋